DBeQ 177355-84-9

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: 340,42 DBeQ é um inibidor de p97 seletivo, potente, reversível e competitivo com ATP com IC50 de 1,5 μM. \ n DBeQ bloqueia UbG76V-GFP, ODD-Luc e Luc-ODC degradação com IC50 de 2,6 μM, 56 μM e 45 μM em células HeLa. DBeQ é pelo menos 50 vezes menos potente para o fator sensível a N-etilmaleimida (NSF) e proteassoma 26S. DBeQ inibe p97 competitivamente em relação ao ATP, com Ki de 3,2 μM, sugerindo que se liga ao sítio ativo do domínio D2. DBeQ (10 μM) bloqueia potentemente a degradação de TCRα-GFP em células HEK293. DBeQ induz CHOP dentro de 3 horas de uma maneira dependente da concentração, mas não aumenta o nível de p21 em células HEK293. DBeQ (15 μM) induz um forte acúmulo de LC3-II no núcleo mais frações citosólicas e enriquecidas com membrana nas células Hela. DBeQ atua bloqueando a degradação autofágica de LC3-II em vez de induzir autofagia em células HeLa. DBeQ (10 μM) promove rapidamente a ativação do [carrasco "caspases-3 e -7 em células HeLa. DBeQ ativa a via apoptótica intrínseca da caspase-9 mais do que a via extrínseca da caspase-8, enquanto o STS ativa ambas as vias em uma extensão semelhante . DBeQ é cinco vezes mais ativo contra células de mieloma múltiplo (RPMI8226) do que fibroblastos de pulmão fetal humano normal (MRC5), com células HeLa e Hek293 mostrando sensibilidades intermediárias. DBeQ exibe seletividade 20 vezes para estabilizar substratos repórter UPS dependentes de p97 vs. independentes em Células HeLa. DBeQ prejudica a degradação de substratos no ERAD e nas vias de autofagia. DBeQ (12 μM) inibe a neutralização intracelular de maneira dependente da dose em células HeLa. DBeQ (10 μM), que inibe completamente a degradação de vírus e anticorpos no destino -of-capsídeo experimento, não evita a degradação de IgG Fc. DBeQ (9 μM) reduz o gradiente inicial de neutralização como uma função da concentração de anticorpo. DBeQ diminui ambos os níveis basais e fosforilação estimulada por nutrientes de alvos MTOR semelhantes aos efeitos da rapamicina em células U20S. Induz de forma rápida e potente a ativação das caspases executoras e a morte celular. Ensaio de cinase de protocolo (apenas para referência): [1]

Manual ATPase Assay

Assay Buffer [20 μL of 2.5× concentration, where 1× = 50 mM Tris (pH 7.4), 20 mM MgCl2, 1 mM EDTA, and 0.5 mM tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP)] is dispensed into each well of a 96-well plate. Purified p97 (25 μL of 50 μM) is diluted in 975 μL of 1× Assay Buffer, and 10 μL is dispensed in each well. DBeQ (10 μL) or 5% DMSO (10 μL) is then added to each well, and the plate is incubated at room temperature for 10 min. The ATPase assay is carried out by adding to each well 10 μL of 500 μM ATP (pH 7.5), incubating at room temperature for 60 min, and then adding 50 μL Kinase Glo Plus reagent, followed by a final 10-min incubation at room temperature in the dark. Luminescence is read on an Analyst AD. DBeQ is assayed at a range of concentrations (0, 0.048, 0.24, 1.2, 6, and 30 μM) in triplicate.

Ensaio de células: [1]

Cell lines	MRC-5, Hek293, HeLa and RPMI8226 cells
Concentrations	33 μM
Incubation Time	48 hours
Method	Cells are seeded on a 384-well solid white plate (5,000 cells/well). Cells are transfected with luciferase siRNA or p97 siRNA (10 nM) for 48 hours or treated with DBeQ for the indicated amount of time. Caspase-3/7 Glo, caspase-6 Glo, caspase-8 Glo, or caspase-9 Glo is added into each well and mixed by shaking at 500 rpm for 1 min. Luminescence signal is determined after incubation at room temperature for 1 hour. Cellular viability is determined with CellTiter-Glo reagen. To determine the IC50 of cellular viability, cells are treated with MG132 or DBeQ at seven concentrations (threefold serial dilutions starting at 33 μM) for 48 hours. IC50 values are calculated from fitting the percentage of luminescence signal normalized to DMSO treated cells).

Conversão de diferentes modelos de animais com base em BSA (valor com base em dados das diretrizes preliminares da FDA)

Species	Baboon	Dog	Monkey	Rabbit	Guinea pig	Rat	Hamster	Mouse
Weight (kg)	12	10	3	1.8	0.4	0.15	0.08	0.02
Body Surface Area (m2)	0.6	0.5	0.24	0.15	0.05	0.025	0.02	0.007
Km factor	20	20	12	12	8	6	5	3

Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by	Animal B Km
	Animal A Km

Por exemplo, para modificar a dose de resveratrol usada para um camundongo (22,4 mg / kg) para uma dose baseada na BSA para um rato, multiplique 22,4 mg / kg pelo fator Km para um camundongo e, em seguida, divida pelo fator Km para um rato. Este cálculo resulta em uma dose equivalente de rato para o resveratrol de 11,2 mg / kg.

Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×	mouse Km(3)	= 11.2 mg/kg
	rat Km(6)

Informação Química

Molecular Weight (MW)	340.42
Formula	C22H20N4
CAS No.	177355-84-9

Storage	3 years -20℃Powder
	6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
Synonyms	JRF 12

Solubility (25°C) *	In vitro	DMSO	68 mg/mL (199.75 mM)
		Water	<1 mg/mL (
		Ethanol	5 mg/mL (14.68 mM)

Chemical Name	2,4-Quinazolinediamine, N2,N4-bis(phenylmethyl)-

Grupo de Produto : Ubiquitina > Inibidor de p97