Dacomitinibe (PF299804, PF299) PF299 1110813-31-4

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 469,94 PF-299804 é um potente inibidor irreversível de pan-ErbB, principalmente para EGFR com IC50 de 6 nM, eficaz contra NSCLCs com mutações EGFR ou ERBB2 (resistente a gefitinib ), bem como aqueles que abrigam a mutação EGFR T790M. Fase 2. \ n Atividade biológica PF299804 é um inibidor específico da família ERBB de quinases. PF299804 inibe a sinalização de EGFR e induz apoptose na linha de células H3255 GR contendo EGFR T790M. PF299804 é eficaz em linhas celulares de NSCLC sensíveis e resistentes a gefitinibe. PF299804 inibe o crescimento de células H3255 e HCC827 projetadas para expressar EGFR T790M. PF299804 inibe a fosforilação de EGFR na presença da mutação T790M. Acredita-se que PF-299804 inibe irreversivelmente a atividade da tirosina quinase ERBB através da ligação no local ATP e modificação covalente de resíduos de cisteína nucleofílicos nos domínios catalíticos de membros da família ERBB. PF299804 mostra efeitos inibidores de crescimento significativos em células de câncer gástrico amplificadas por HER2 (SNU216, N87) e tem valores de concentração inibitórios 50% mais baixos em comparação com outros inibidores de tirosina quinase EGFR, incluindo gefitinibe, lapatinibe, BIBW-2992 e CI-1033 . PF299804 induz apoptose e parada de G1 e inibe a fosforilação de receptores na família HER e vias de sinalização a jusante, incluindo STAT3, AKT e quinases extracelulares reguladas por sinal (ERK) em células de câncer gástrico amplificadas por HER2. PF299804 também bloqueia a formação de heterodímero EGFR / HER2, HER2 / HER3 e HER3 / HER4, bem como a associação de HER3 com p85α em células SNU216. Uma pesquisa recente usa 47 câncer de mama humano e linhas epiteliais de mama imortalizadas para avaliar os efeitos de inibição de PF299804, os resultados indicam que PF299804 inibe preferencialmente o crescimento de linhas de células de câncer de mama amplificadas por HER-2 do que linhas não amplificadas (RR = 3,39, p Oralmente administrado PF299804 efetivamente inibe o crescimento de xenoenxertos HCC827 Del / T790M. A baixa administração oral de PF-299804 (15mg / kg) causa atividade antitumoral significativa, incluindo regressões tumorais marcadas em uma variedade de modelos de xenoenxertos de tumor humano que expressam e / ou superexpressam membros da família ERBB ou contêm a mutação dupla (L858R / T790M) em ERBB1 (EGFR) associada à resistência a gefitinibe e erlotinibe. \ n Ensaio de quinase ERBB baseado em ELISA As proteínas de fusão citoplasmática ERBB1, ERBB 2 e ERBB4 são feitas clonando a sequência ERBB1 ( Met-668 a Ala-1211), ERBB2 (Ile-675 a Val-1256) e sequência ERBB4 (Gly-259 a Gly-690) no vetor baculoviral pFastBac usando PCR. As proteínas são expressas ed em células de inseto Sf9 infectadas com baculovírus como proteínas de fusão GST. As proteínas são purificadas por cromatografia de afinidade usando contas de glutationa sefarose. A inibição da atividade da tirosina quinase ERBB é avaliada usando um ensaio de tirosina quinase receptor baseado em ELISA. Reações de quinase (HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 125 mM, MgCl2 10 mM, ortovanadato de sódio 100 μM, ditiotreitol 2 mM, ATP 20 μM, PF299804 ou controle de veículo e GST-erbB 1-5 nM por 50 μL de mistura de reação ) são executados em placas de 96 poços revestidos com 0,25 mg / mL de poli-Glu-Tyr. As reações são incubadas durante 6 minutos à temperatura ambiente enquanto são agitadas. As reações de quinase são interrompidas pela remoção da mistura de reação e, em seguida, os poços são lavados com tampão de lavagem (0,1% Tween 20 em PBS). Resíduos de tirosina fosforilados são detectados pela adição de 0,2 μg / mL de anticorpo antifosfotirosina (Oncogene Ab-4; 50 μL / poço) acoplado a peroxidase de rábano (HRP) diluída em PBS contendo 3% de BSA e 0,05% de Tween 20 por 25 minutos enquanto é agitado em temperatura do quarto. O anticorpo é removido e as placas são lavadas em tampão de lavagem. O substrato HRP (SureBlue3,3, 5,5-tetrametil benzidina ou TMB) é adicionado (50 μL por poço) e incubado por 10-20 minutos enquanto é agitado em temperatura ambiente. A reação TMB é interrompida com a adição de 50 μL de solução de interrupção (0,09 N H2SO4). O sinal é quantificado medindo a absorbância a 450 nm. Os valores de IC50 são determinados para PF299804 usando o método de efeito médio. \ n Método O crescimento e a inibição do crescimento são avaliados pelo ensaio 5- (3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfofenil) -2H-tetrazólio (MTS). Este ensaio, um método colorimétrico para determinar o número de células viáveis, é baseado na biorredução de MTS pelas células para um produto formazan que é solúvel em meio de cultura celular, pode ser detectado espectrofotometricamente. As células são expostas ao tratamento por 72 horas, e o número de células utilizadas por experimento é determinado empiricamente. Todos os pontos experimentais são configurados em 6 a 12 poços, e todos os experimentos são repetidos pelo menos três vezes. Os dados são exibidos graficamente usando GraphPad Prism versão 3.00 para Windows (GraphPad Software). As curvas são ajustadas usando um modelo de regressão não linear com uma resposta à dose sigmoidal.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor EGFR