Pelitinibe (EKB-569) 257933-82-7

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 467,92 Pelitinibe (EKB-569) é um potente inibidor irreversível de EGFR com IC50 de 38,5 nM. Fase 2. \ n Atividade biológica Pelitinibe exibe atividade inibitória muito maior contra EGFR, em comparação com o c-erbB-2 intimamente relacionado, bem como outras quinases como Src, Cdk4, c-Met, Raf e MEK / ERK, com IC50 variando de 282 nM para Src a> 20 μM para Cdk4. De forma consistente, o tratamento com Pelitinibe inibe significativamente a autofosforilação de EGFR, mas não c-Met em células A431. Pelitinib inibe potentemente a proliferação de queratinócitos humanos normais (NHEK), bem como células tumorais A431 e MDA-468 com IC50 de 61 nM, 125 nM e 260 nM, respectivamente, enquanto exibe pouca atividade contra células MCF-7 com IC50 de 3,6 μM. Pelitinib inibe a fosforilação de EGFR induzida por EGF em células A431 e NHEK com IC50 de 20-80 nM, bem como a fosforilação de STAT3 com IC50 de 30-70 nM. Pelitinibe a 75-500 nM também inibe especificamente a ativação de AKT e ERK1 / 2, sem afetar a via de NF-κB. Em células NHEK, Pelitinib também inibe potentemente a ativação de EGFR mediada por TGF-α com IC50 de 56 nM, bem como a ativação de STAT3 e ERK1 / 2 com IC50 de 60 nM e 62 nM, respectivamente. Uma dose oral única de 10 mg / kg de Pelitinibe inibe potentemente a fosforilação de EGFR em xenoenxertos A431 com EGFR superexpresso, em 90% em 1 hora e em> 50% após 24 horas. A administração de Pelitinibe a 20 mg / kg / dia inibe a tumorigênese em camundongos APCMin / + em 87%, equivalente ao efeito usado com 2 vezes as doses de EKI-785 (40 mg / kg / dia), consistente com maior potência in vivo . O pelitinibe inibe seletivamente a sinalização do EGFR nas células epiteliais das vias aéreas in vivo. No modelo de camundongo de remodelação epitelial das vias aéreas que é induzida por infecção viral e apresenta uma mudança retardada, mas permanente para metaplasia de células caliciformes, o tratamento com Pelitinibe a 20 mg / kg / dia corrige todos os 3 aspectos da remodelação epitelial, bloqueando completamente o aumento de células ciliadas células e diminuição das células de Clara, e inibindo significativamente a metaplasia das células caliciformes. \ n Autofosforilação de EGFR em células Para experimentos usando células em cultura, as células A431 são tratadas com várias concentrações de Pelitinibe por 2,75 horas antes da co-incubação com 100 ng / mL de EGF por 0,25 hora. As células são lavadas duas vezes com solução salina tamponada com fosfato frio (PBS) antes de adicionar ao tampão de lise (Tris 10 mM, pH 7,5, ácido etilenodiamina tetra-acético 5 mM (EDTA), NaCl 150 mM, Triton X-100 a 1%, 1% Desoxicolato de sódio, SDS 0,1%, PMSF 1 mM, pepstatina A 10 mg / mL, leupeptina 10 mg / mL, aprotinina 20 KIU / mL, ortovanadato de sódio 2 mM e fluoreto de sódio 100 mM) por 20 minutos no gelo, antes da imunoprecipitação e Imunoblotting SDS-PAGE. Para imunoprecipitação, as células cultivadas são colocadas em tampão de lise frio e imediatamente homogeneizadas em gelo com um polytron com vários pulsos. O homogenato é primeiro centrifugado a 2500 rpm (20 minutos, 4 ° C) e depois novamente a 14.000 rpm numa microcentrífuga (10 minutos, 4 ° C). Os sobrenadantes (1000 μg de proteína) são incubados por 2 horas a 4 ° C com 15 mL de anticorpo policlonal EGFR. Após 2 horas, 50 μL de grânulos de agarose de proteína G plus / proteína A são adicionados e incubados com rotação constante por 2 horas a 4 ° C. Após a lavagem com tampão de lise, as contas são fervidas por 2 minutos em tampão de amostra Laemmli. As proteínas são então resolvidas por SDS-PAGE, transferidas para a membrana de imobilon e sondadas durante a noite com um anticorpo anti-fosfotirosina conjugado com peroxidase de rábano (HRP). As membranas são desenvolvidas usando o reagente ECL. A proteína EGFR total é determinada por remoção das membranas e nova sondagem com anticorpos específicos do receptor. A quantificação das bandas é feita por densitometria, usando o software ImageQuant com um scanner de transmitância a laser Molecular Dynamics. \ n Método As células são semeadas em placas de 96 poços e, após 2 horas, Pelitinibe é adicionado e incubado por 5 dias. Após a incubação, o meio é removido de cada poço e meio fresco (150 μL) + 1 mg / mL de solução de MTT (50 μL) é adicionado. Após incubação por 2 horas a 37 ° C, o meio é substituído por 150 μL de DMSO e a absorbância a 540 nm em cada poço é determinada. O IC50 é calculado por regressão linear dos dados.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor EGFR