Neratinib (HKI-272) 698387-09-6

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 557,04 Neratinib (HKI-272) é um inibidor HER2 e EGFR altamente seletivo com IC50 de 59 nM e 92 nM; inibe fracamente KDR e Src, sem inibição significativa para Akt, CDK1 / 2/4, IKK-2, MK-2, PDK1, c-Raf e c-Met. Fase 3. \ n Atividade biológica Neratinib inibe fracamente as tirosina quinases KDR e Src com IC50 de 0,8 μM e 1,4 μM, respectivamente, sendo 14 e 24 vezes menos ativo em comparação com HER2. Neratinib não exibe atividade contra outras serina-treonina quinases, como Akt, ciclina D1 / cdk4, ciclina E / cdk2, ciclina B1 / cdk1, IKK-2, MK-2, PDK1, c-Raf e Tpl-2, também como a tirosina quinase c-Met. Neratinib inibe seletivamente a proliferação de células 3T3 transfectadas com o HER2 (3T3 / neu), bem como duas outras células SK-Br-3 e BT474 superexpressando HER-2 com valores de IC50 de 2-3 nM, exibindo> 230 vezes potência em comparação com células 3T3 não transfectadas, bem como MDA-MB-435 e SW620 que são EGFR- e HER2-negativas. Neratinib também inibe a proliferação de células A431 dependentes de EGFR com um IC50 de 81 nM. Neratinib reduz a autofosforilação do receptor HER2 em células BT474 com um IC50 de 5 nM e a fosforilação dependente de EGF de EGFR em células A431 com IC50 de 3 nM. O bloqueio de HER-2 pelo Neratinib resulta na inibição das vias MAPK e Akt a jusante com IC50 de 2 nM, mais potentemente do que o Trastuzumab. Neratinib inibe a expressão da ciclina D1 e a fosforilação da produção do gene de susceptibilidade a Rb em células BT474 com IC50 de 9 nM, levando à parada de G1-S e, finalmente, diminuição da proliferação celular. A administração oral de Neratinib inibe significativamente o crescimento dos xenoenxertos 3T3 / neu, com inibição de 34%, 53%, 98% e 98% na dose de 10, 20, 40 e 80 mg / kg / dia, respectivamente. Consistente com a inibição da fosforilação de HER-2 em 84% dentro de 1 hora de administração a 40 mg / kg / dia, Neratinib inibe o crescimento de xenoenxertos BT474 em 70-82%, 67% e 93% na dose de 5, 10 e 40 mg / kg / dia, respectivamente. Neratinib também é eficaz contra xenoenxertos SK-OV-3 com inibição de 31% e 85% a 5 e 60 mg / kg / dia, respectivamente. Neratinib é menos potente contra xenoenxertos de A431 dependentes de EGFR do que tumores dependentes de HER-2, com inibição de 32% e 44% a 5 e 20 mg / kg / dia, respectivamente. Neratinib exibe pouca atividade contra xenoenxertos MCF-7 e MX-1 expressando baixos níveis de HER-2 e EGFR, com apenas 28% de inibição a 80 mg / kg / dia, sugerindo que Neratinib tem atividade seletiva para células que expressam HER-2 ou EGFR . \ n Ensaio de autofosforilação livre de células usando fluorometria resolvida no tempo Neratinib é preparado como estoques de 10 mg / mL em DMSO e diluído em HEPES 25 mM (pH 7,5; 0,002 ng / mL-20 μg / mL). Fragmentos purificados do terminal COOH recombinante de HER2 (aminoácidos 676-1255) ou receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) (aminoácidos 645-1186) [diluído em HEPES 100 mM (pH 7,5) e glicerol 50%] é incubado com concentrações crescentes de Neratinib em HEPES 4 mM (pH 7,5), MnCl2 0,4 mM, vanadato de sódio 20 μM e DTT 0,2 mM por 15 minutos à temperatura ambiente em placas de ELISA de 96 poços. A reação da quinase é iniciada pela adição de 40 μM de ATP e 20 mM de MgCl2 e pode prosseguir por 1 hora em temperatura ambiente. As placas são lavadas e a fosforilação é detectada usando anticorpos anti-fosfo-tirosina marcados com európio (15 ng / poço). Após as etapas de lavagem e intensificação, o sinal é detectado usando um leitor de fluorescência Victor2 (comprimento de onda de excitação 340 nm, comprimento de onda de emissão 615 nm). A concentração de Neratinib que inibe a fosforilação do receptor em 50% (IC50) é calculada a partir das curvas de inibição. Método As células são expostas a várias concentrações de Neratinib durante 2 ou 6 dias. A proliferação celular é determinada usando sulforhodamina B, um corante de ligação a proteínas. Resumidamente, as células são fixadas com ácido tricloroacético a 10% e lavadas extensivamente com água. As células são então coradas com 0,1% de sulforhodamina B e lavadas em 5% de ácido acético. O corante associado à proteína é solubilizado em Tris 10 mM e a absorvância é medida a 450 nM. A concentração de Neratinib que inibe a proliferação celular em 50% (IC50) é determinada a partir de curvas de inibição.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor HER2