CP-673451

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: 417.5 CP-673451 é um inibidor seletivo de PDGFRα / β com IC50 de 10 nM / 1 nM, exibe seletividade> 450 vezes sobre outros receptores angiogênicos, tem atividade antiangiogênica e antitumoral . \ n Atividade biológica CP 673451 é um inibidor seletivo de PDGFRα / β com IC50 de 10 nM / 1 nM, exibe seletividade> 450 vezes sobre outros receptores angiogênicos. Em tumores de glioblastoma, CP-673451 (33 mg / kg) fornece> 50% de inibição do receptor PDGFR-β por 4 horas correspondendo a um EC50 de 120 ng / mL no plasma em Cmax. Em um modelo de angiogênese de esponja, CP-673451 inibe 70% da angiogênese estimulada por PDGF-BB a uma dose de 3 mg / kg (qd × 5, po, correspondendo a 5,5 ng / mL em Cmax). CP-673451 diminui a taxa de proliferação celular por meio de mecanismos que envolvem fosforilação reduzida de GSK-3α e GSK-3β. Em ambas as culturas RD e RUCH2, o CP-673451 prejudica a capacidade de formação de rabdosfera e a diferenciação celular, causando aumento da senescência. CP 673451 (uma vez ao dia po? 0 dias de dosagem rotineiramente) inibe o crescimento do tumor (ED50 Em camundongos com xenoenxerto RUCH2, CP 673451 reduz o crescimento do tumor e a infiltração de células estromais. \ N Ensaio de inibição de quinase Um construto de domínio de quinase marcado com glutationa S-transferase da porção intracelular do PDGFR-β (aminoácidos 693-1401, número de acesso J03278) é expressa em células Sf-9 (sistema de expressão de baculovírus). A cinética da enzima é determinada incubando a enzima com concentrações crescentes de ATP em tampão de fosforilação [50 mmol / L de HEPES (pH 7,3), 125 mmol / L de NaCl, 24 mmol / L de MgCl2 em placas de 96 poços Nunc Immuno MaxiSorp previamente revestidas com 100 μL de 100 μg / mL de poli-Glu-Tyr (proporção de 4: 1 ) diluído em PBS. \ n Após 10 minutos, as placas são lavadas (PBS, 0,1% Tween 20), incubadas com anticorpo anti-fosfotirosina-peroxidase de rábano e diluídas em PBS, 0,05% Tween 20, 3% BSA por 30 minutos à temperatura ambiente. As placas são lavadas como acima e incubadas com 3,3 ', 5,5'-tetrametilbenz eu janto. A reação é interrompida pela adição de um volume igual de 0,09 NaH2SO4. O sinal dependente da fosfotirosina é então quantificado num leitor de placas a 450 nm. \ n Para ensaios de enzima de rotina, a enzima é incubada com ATP 10 μM (final) na presença de composto diluído em DMSO (ensaio de DMSO 1,6% v / v final) por 30 minutos à temperatura ambiente em placas, como acima, previamente revestidas com 100 μL de 6,25 μg / mL poli-Glu-Tyr. O restante do ensaio é realizado como acima, e os valores IC50 são calculados como a inibição percentual do controle. Método Células PAE expressando de forma estável PDGFR e VEGFR de comprimento total foram geradas. Para ensaios de seletividade baseados em células, as células PAE são transfectadas com PDGFR-a, PDGFR-h ou VEGFR-2 humano de comprimento total. As células são semeadas a 4 × 105 células / mL em 50 μL de meio de crescimento (meio F-12 de Ham suplementado com 10% de soro fetal bovino, 50.000 unidades de penicilina e estreptomicina e 500 μg / mL de gentamicina) por poço em placas de 96 poços . Após 6 a 8 horas, o meio de crescimento é substituído por 50 μL de meio sem soro (como acima, mas com 0,1% de soro fetal bovino) e as células são incubadas durante a noite. \ n Imediatamente antes da adição do composto, o meio foi substituído por 95 μL de meio sem soro. Os compostos são diluídos em DMSO 100%, adicionados às células a uma concentração final de DMSO de 0,25% v / v e incubados a 37 ° C durante 10 minutos. As células são estimuladas com o ligando apropriado e incubadas como acima por mais 8 minutos. O meio é removido e as células lavadas uma vez com PBS, em seguida, lisadas com 50 μL de tampão HNTG [20 mmol / L HEPES (pH 7,5), 150 mmol / L de NaCl, 2% Triton X-100, 10% de glicerol, 5 μmol / L EDTA, 2 mmol / L de NaVO4 e 1 comprimido de inibidor de protease completo sem EDTA por 25 mL] por 5 minutos em temperatura ambiente. \ n Os lisados ​​são então diluídos com 50 μL de tampão HG [20 mmol / L HEPES (pH 7,5), 10% de glicerol]. Os lisados ​​celulares diluídos são misturados completamente, 50 μL de sobrenadante são transferidos para a placa de captura ELISA e incubados em temperatura ambiente por 2 horas com agitação. As placas de captura de ELISA são preparadas revestindo placas antirabbit ReactiBind de cabra de 96 poços com 100 μL / poço de 5 μg / mL de coelho anti-PDGFR-h humano, anti-PDGFR-a ou anticorpo anti-VEGFR-2 para 60 a 90 minutos. \ n No final da incubação de 2 horas, as placas são lavadas (PBS, 0,1% Tween 20) antes da incubação com anticorpo anti-fosfotirosina-peroxidase de rábano (diluído em PBS, 0,05% Tween 20) por 30 minutos em temperatura ambiente. As placas são lavadas novamente, depois incubadas com tetrametilbenzidina e avaliadas como descrito acima. Os valores IC50 são calculados como a inibição percentual do controle.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor PDGFR