Peso molecular: 266,29 Tyrphostin AG 1296 é um inibidor de PDGFR com IC50 de 0,3-0,5 μM, sem atividade para EGFR. \ N Atividade biológica AG 1296 inibe seletivamente o receptor quinase de PDGF e a síntese de DNA dependente de PDGF em células suíças 3T3 e em suínos células endotelais da aorta com concentrações inibitórias de 50% abaixo de 5 e 1μM, respectivamente. AG1296 inibe FGFR e c-Kit com IC50 de 12,3 μM e 1,8 μM em células Swiss 3T3. AG1296 inibe potentemente a sinalização de receptores PDGF-α e -β humanos, mas não tem efeito na autofosforilação do VEGFR KDR ou na síntese de DNA induzida por VEGF em células endoteliais aorticas porcinas. \ n O tratamento com AG1296 reverte o fenótipo transformado de células NIH 3T3 transfectadas com sis, mas não tem efeito sobre as células NIH3T3 transformadas com src. AG1296 é um inibidor competitivo de ATP. AG1296 não interfere com a ligação de PDGF nem com a dimerização do receptor de PDGF, embora abole a autofosforilação do receptor de PDGF. Assim, AG1296 é um inibidor puro da atividade catalítica do receptor tirosina quinase. Ensaios de autofosforilação de membrana As membranas são preparadas a partir de culturas confluentes de células Swiss 3T3 conforme descrito. Para medir a autofosforilação do receptor, 10μg de proteína de membrana por ensaio são incubados por 20 min em gelo na presença de 1,2μg / mL de EGF ou 2μg / mL de PDGF, ou ambos; Hepes 50 mM (pH 7,5); e 3 mM MnCl2 em um volume de 45μl. Para testar os efeitos das tirfostinas, estas são adicionadas em um volume de 0,5 μl (em DMSO; concentração final, 0,5%) 15 min antes da adição dos fatores de crescimento. \ n A fosforilação é iniciada pela adição de [γ-32P] ATP e terminada após 2 min pela adição de 10 μL de uma solução contendo 6% de SDS, 30% de β-mercatoetanol, 40% de glicerol e 0,5 mg / mL de azul de bromofenol. As amostras são aquecidas por 5 min a 95 ℃ e submetidas a SDS-PAGE usando géis de acrilamida a 10%. Os géis são corados e secos e submetidos a análise autorradiográfica. Conversão de diferentes modelos de animais com base em BSA (valor com base em dados das diretrizes preliminares da FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por exemplo, para modificar a dose de resveratrol usada para um camundongo (22,4 mg / kg) para uma dose baseada na BSA para um rato, multiplique 22,4 mg / kg pelo fator Km para um camundongo e, em seguida, divida pelo fator Km para um rato. Este cálculo resulta em uma dose equivalente de rato para o resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor PDGFR
