AT9283 896466-04-9

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 381,43 AT9283 é um inibidor JAK2 / 3 potente com IC50 de 1,2 nM / 1,1 nM; também potente para Aurora A / B, Abl (T315I). Fase 2. \ n A atividade biológica AT9283 leva a um fenótipo poliplóide claro ao inibir a atividade da quinase Aurora B em células HCT116 com IC50 de 30 nM. Além disso, AT9283 também produz a inibição potente na formação de colônias HCT116. Em camundongos com xenoenxerto de carcinoma de cólon humano HCT116, o tratamento com AT9283 (15 mg / kg e 20 mg / kg) por 16 dias resulta em uma inibição significativa do crescimento do tumor de 67% e 76%, respectivamente. Além disso, AT9283 também exibe uma meia-vida significativamente mais longa em tumores (2,5 horas) em comparação com o plasma (0,5 horas) e biodisponibilidade oral modesta em camundongos (Fp.o. = 24%). Ensaios de cinase Aurora A e Aurora B Os ensaios para Aurora A e B são realizados em um formato DELFIA. A enzima Aurora A é incubada com AT9283 e substrato de maré cruzada 3 μM (biotina-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG) em MOPS 10 mM, pH 7, BSA 0,1 mg / mL, Brij-35 0,001%, glicerol 0,5%, EDTA 0,2 mM, MgCl2 10 mM , 0,01% de β-mercaptoetanol, 15 μM de ATP e 2,5% de DMSO. A enzima Aurora B é incubada com AT9283, 3 μM do substrato acima em Tris 25 mM, pH 8,5, MgCl2 5 mM, 0,1 mg / mL BSA, Tween-20 0,025%, DTT 1 mM, ATP 15 μM e DMSO 2,5% . As reações podem prosseguir por 60 minutos e 45-90 minutos para Aurora A e Aurora B, respectivamente, antes de serem temperadas com EDTA. As misturas de reação são então transferidas para uma placa revestida com neutravidina, e o peptídeo fosforilado é quantificado por meio de um anticorpo específico para fosfo e um anticorpo secundário marcado com európio usando fluorescência resolvida no tempo (excitação, 337 nm; emissão, 620 nm). Os valores de IC50 para os compostos de controle são 92 nM (ensaio Aurora A) e 17 nM (Aurora B). \ n Método \ n As células HCT 116 são cultivadas em DMEM + 10% FBS + GLUTAMAX I. Placas tratadas de cultura de tecido de 96 poços de fundo plano (transparente) pretas são semeadas em 200 μL de meio e incubadas por aproximadamente 16 horas a 37 ° C em uma atmosfera umidificada de 5% de CO2 no ar. As células são tratadas com composto de teste em nove concentrações diferentes (abrangendo 1 nM a 10 μM, mais controle de veículo DMSO) e, em seguida, incubadas por 72 horas. As observações morfológicas da poliploidia das células são então anotadas. A concentração de AT9283 necessária para produzir um fenótipo poliplóide distinto é relatada. As células são semeadas a uma concentração de 75-100 células / mL de meio de cultura relevante em placas de cultura de tecidos de 6 ou 24 poços e podem se recuperar por 16 horas. O composto de teste (11 concentrações abrangendo 0,1 nM a 10 μM) ou controle de veículo (DMSO) é adicionado aos poços duplicados para dar uma concentração final de DMSO de 0,1%. Após a adição do composto, as colônias podem crescer entre 10 e 14 dias para uma contagem discreta ótima de colônias. As colônias são fixadas em 2 mL de fixador Carnoys (25% de ácido acético, 75% de MeOH) e coradas em 2 mL de 0,4% p / v de violeta de cristal. O número de colônias em cada poço é contado. Os valores de IC50 são calculados por curvas de IC50 sigmoidal dose-resposta (declive variável) usando o software Prism Graphpad. \ n

Grupo de Produto : Epigenética > Inibidor JAK