GSK343 ​​1346704-33-3

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 541,69 GSK343 ​​é um inibidor EZH2 potente e seletivo com IC50 de 4 nM, mostrando 60 vezes de seletividade contra EZH1 e> 1000 vezes de seletividade contra outras metiltransferases de histona. \ n Biológico A atividade GSK343 ​​inibe a trimetilação de H3K27 (H3K27me3) com IC50 de 174 nM em células de câncer de mama HCC1806. GSK343 ​​inibe potentemente a proliferação celular em células de câncer de mama e células de câncer de próstata, e a linha de células de câncer de próstata LNCaP é a mais sensível a GSK343, com IC50 de 2,9 μM. GSK343 ​​suprime significativamente o crescimento de células EOC cultivadas em matriz extracelular matrigel 3D (ECM), que imita o microambiente tumoral in vivo. Além disso, GSK343 ​​também induz apoptose de células EOC em 3D e inibe significativamente a invasão de células EOC. \ n Ensaios bioquímicos in vitro contra metiltransferases de histona A atividade contra EZH2 é avaliada usando o complexo PRC2 de 5 membros (Flag-EZH2, EED, SUZ12, AEBP2, RbAp48). O protocolo de ensaio pode ser resumido como segue: reservas 10 mM de compostos são preparadas a partir de sólido em DMSO 100%. Uma placa mestre de diluição em série de 11 pontos é preparada em formato de 384 poços (diluição 1: 3, colunas 6 e 18 eram controles de DMSO de volume igual) e distribuída para placas prontas de ensaio usando tecnologia de distribuição acústica para criar um selo de 100 nL de composto e controles de DMSO . As adições de ensaio consistiram em adições de volume igual de EZH2 10 nM e a solução de substrato (5 µg / mL de nucleossomos HeLa e 0,25 µM [3H] -SAM) dispensados ​​em placas de ensaio usando uma dispensa combinada de várias gotas. As placas de reação são incubadas durante 1 hora e extintas com uma adição de volume igual de 0,5 mg / mL PS-PEI Imaging Beads (RPNQ0098) contendo 0,1 mM de SAM não marcado. As placas são seladas, adaptadas ao escuro por 30 minutos e uma imagem de luminescência final de 5 minutos é adquirida usando um gerador de imagens Viewlux. Estatísticas de placa, como Z` e sinal de fundo, bem como curvas de resposta à dose, são analisadas usando Activity BaseXE. A atividade bioquímica in vitro de EZH1 é avaliada como parte de um complexo PRC2 de 5 membros usando um ensaio de SPA de 384 poços idêntico ao EZH2. Os componentes do tampão, dispensação do reagente, preparação da placa do composto, condições de extinção e análise de dados são idênticos para EZH1 e EZH2 com concentrações de ensaio final de 20 nM EZH1, 5 μM / mL de nucleossomos HeLa e 0,25 μM [3H] -SAM. Outras análises de dados, pivôs e visualizações de pIC50 são habilitados pelo TIBCO Spotfire. Os compostos são perfilados em Reaction Biology Corp. (Malvern, PA) para avaliar a inibição em seu painel de ensaios de histona metiltransferase. A atividade da metiltransferase é avaliada usando a tecnologia HotSpot, um ensaio de ligação de filtro baseado em radioisótopo miniaturizado. Os inibidores são dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO) e testados em concentrações de até 100 uM com uma concentração final de DMSO de 2%. O tampão contendo a metiltrasferase na concentração listada e seu substrato preferido, conforme mostrado na tabela anexa, é pré-incubado com o composto por 10 min. As reações são iniciadas pela adição de 1 uM de S-adenosil-L- [metil-3H] metionina (SAM), deixada incubar por 60 min a 30C seguido por transferência para papel de filtro P81 e lavagem com PBS antes da detecção. Método Para contabilizar as taxas de duplicação variáveis ​​entre as linhas de células cancerosas, a semeadura de células ideal é determinada empiricamente para todas as linhas de células examinando seu crescimento em uma placa de 384 poços ao longo de 6 dias com uma ampla gama de densidades de semeadura. As células são então plaqueadas na densidade ideal de semeadura e podem aderir durante a noite. As células são tratadas em duplicado com uma série de diluição de 2 vezes de 20 pontos do composto ou 0,147% de DMSO (controle de veículo) e incubadas durante 6 dias a 37 ° C em 5% de CO2. As células são então lisadas com 25 μl de CellTiter-Glo por poço e a quimioluminescência é quantificada com um leitor de microplaca TECAN Safire2. Além disso, uma placa de células não tratadas é colhida no momento da adição do composto (T0) para quantificar o número inicial de células. Os valores CTG após 6 dias de tratamento foram expressos como uma percentagem do valor T0 e representados graficamente contra a concentração do composto. Os dados são ajustados com uma equação de 4 parâmetros para gerar uma curva de resposta à concentração e a concentração de composto necessária para inibir 50% do crescimento (gIC50) é determinada

Grupo de Produto : Epigenética > Inibidor de histona metiltransferase