EI1 1418308-27-6

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 390.48 EI1 é um inibidor EZH2 potente e seletivo com IC50 de 15 nM e 13 nM para EZH2 (WT) e EZH2 (Y641F), respectivamente. \ n Atividade biológica Em células DLBCL, EI1 inibe a metilação celular H3K27 e ativa a expressão do gene p16 alvo de Ezh2. Em fibroblastos embrionários de camundongo, EI1 também inibe o H3K27me3 e a proliferação celular. Além disso, EI1 inibe seletivamente o crescimento de células DLBCL portadoras da mutação Ezh2 e causa parada do ciclo celular e apoptose. Ensaio bioquímico Para a determinação de IC50, EI1 é diluído em série três vezes em DMSO para um total de 12 concentrações, com a concentração inicial de 1 μM. A reação é incubada à temperatura ambiente durante 120 min, e interrompida pela adição de solução de extinção (2,5% TFA com 320 nM d4-SAH). A produção de SAH é quantificada usando uma espectrometria de massa triplo quadrupolo API 4000 com Turbulon Spray acoplado com Prominence UFLC. A porcentagem de inibição é normalizada usando controles positivo (sem inibidor) e negativo (sem enzima), e IC50 calculado usando PRISM. Os estudos de enzimologia da competição de S-adenosil metionina (SAM) são realizados com ligeira modificação da condição de reação: 10 μM de EI1 é usado como a dose inicial para a diluição em série. SAM é titulado em uma faixa entre 1 μM e 50 μM (correspondendo a 1 × Km e 50 × Km), e o peptídeo substrato está presente na mistura de reação final em sua condição saturada (10 μM). Para o perfil de histona metiltransferase (HMT) na Tabela 1, todos os HMTs são proteínas recombinantes purificadas do sistema Escherichia coli ou Baculovírus. O domínio catalítico de G9a, SuV39H2, Set7 / 9, CARM1, SETD8, NSD3, SETD2 e Dot1L, e a proteína SmyD2 de comprimento total foram usados ​​nos ensaios bioquímicos. As reações bioquímicas de HMT são cuidadosamente caracterizadas com estudos de enzimologia e a SAM e o Km do substrato determinados. As concentrações de SAM e substrato são mantidas em seus respectivos Km para a maioria dos HMTs, exceto aqueles (SmyD2 e Set7 / 9) com baixo valor de SAM-Km, para os quais 0,5 μM de SAM é utilizado. Todas as reações de HMT são realizadas usando o mesmo formato de ensaio em que a produção de SAH a partir da reação bioquímica é quantificada por LC-MS. \ n Método Células de linfoma difuso de grandes células B de crescimento exponencial (DLBCL) são semeadas em placas de 12 poços a uma densidade de 1 × 105 células / mL com a concentração indicada de EI1. O número de células viáveis ​​é determinado a cada 3-4 d por até 14 ou 15 d pelo Vi-CELL. Fibroblastos embrionários de camundongo (MEFs) são semeados em uma placa de seis poços a 2,5 × 104 células / mL e tratados com EI1 (3,3 μM) ou 4-OH-tamoxifeno (100 nM). O número de células viáveis ​​é determinado nos dias 3, 6 e 11. Nos dias de contagens de células, meio de crescimento fresco e composto são reabastecidos e as células divididas de volta a uma densidade de 1 × 105 células / mL. O número total de células é expresso como células viáveis ​​ajustadas à divisão por mililitro. IC50 é calculado por PRISM e todos os experimentos de proliferação são repetidos mais de duas vezes e dados representativos são apresentados.

Grupo de Produto : Epigenética > Inibidor de histona metiltransferase