UNC0631 1320288-19-4

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 635,93 UNC0631 é um potente inibidor da histona metiltransferase G9a com IC50 de 4 nM. \ n Atividade biológica Em células MCF7, 22RV1 e IMR90, UNC0631 reduz potentemente os níveis de H3K9me2 e mostra excelente separação de potência funcional versus toxicidade celular. UNC0631, portanto, pode ser usado como uma ferramenta para a comunidade de pesquisa biomédica para investigar a biologia de G9a e seu papel na remodelação da cromatina. Ensaios acoplados a SAHH Este ensaio utiliza SAHH para hidrolisar o produto de metiltransferência SAH em homocisteína e adenosina na presença de adenosina desaminase que converte adenosina em inosina. A concentração de homocisteína é então determinada através da conjugação de sua porção sulfidrila livre a um fluoróforo sensível a tiol, ThioGlo. Para determinações de IC50, as misturas de ensaio são preparadas em tampão de fosfato de potássio 25 mM pH 7,5, EDTA 1 mM, MgCl2 2 mM, Triton X-100 a 0,01% com SAHH 5 μM, 0,3 U / mL de adenosina desaminase, SAM 25 μM e 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 e SUV39H2 são ensaiados a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM e 100 nM, respectivamente. Os inibidores são adicionados em concentrações que variam de 4 nM a 16 μM. Após 2 min de incubação, as reações são iniciadas pela adição dos peptídeos de histona: 10 μM H3 (1–25) para G9a, 20 μM H3 (1–25) para GLP, 100 μM H3 (1–25) para SETD7, 500 μM H4 (1–24) para SETD8, 10 μM H4 (1–24) para PRMT3 e 200 μM H3K9Me1 (1–15) para SUV39H2. A reação de metilação é seguida pelo monitoramento do aumento da fluorescência usando o leitor de placa Biotek Synergy2 com filtro de excitação 360/40 nm e filtro de emissão 528/20 nm por 20 min no formato de placa de 384 poços. Os valores da atividade são corrigidos subtraindo o fundo causado pelo peptídeo ou pela proteína. Os valores IC50 são calculados usando Sigmaplot. Os desvios padrão são calculados a partir de dois experimentos independentes. Método MDA-MB-231, PC3, células HCT116 são cultivadas em RPMI com 10% de FBS, células 22RV1 em alphaMEM e 10% de FBS, células MCF7 e IMR90 em DMEM com 10% de FBS. As células são tratadas com inibidores por 48 h. A mídia é removida e substituída por DMEM 10% FBS sem vermelho de fenol suplementado com 1mg / mL de MTT e incubado por 1–2 h. As células vivas reduzem o MTT amarelo a formazan roxo. O formazan é solubilizado em isopropanol acidificado e Triton a 1%. A absorbância do sinal de Formazan é medida a 570 nm e corrigida para o fundo de 650 nm. IC50s são calculados usando o pacote estatístico GraphPad Prizm com ajuste de curva de resposta de dose de declive variável sigmoidal.

Grupo de Produto : Epigenética > Inibidor de histona metiltransferase