ML324 1222800-79-4

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 349,43 ML324 é um inibidor seletivo de jumonji histona desmetilase (JMJD2) com IC50 de 920 nM. \ n Atividade biológica ML324 exibe boa permeabilidade de células Caco-2 e possui excelente estabilidade microssomal na presença de microssomas de fígado de camundongo e rato. ML324 demonstra atividade antiviral potente contra infecção pelo vírus herpes simplex (HSV) e citomegalovírus humano (hCMV) por meio da inibição da expressão do gene IE viral. Em um modelo de explante de gânglios de camundongos de camundongos infectados de forma latente, ML324 suprime a formação de placas de HSV e bloqueia a reativação de HSV-1. Ensaio AlphaScreen A inibição de JMJD2E é avaliada usando o ensaio histona desmetilase AlphaScreen. Este ensaio usa um substrato de peptídeo biotinilado e se baseia na detecção da marca de metila do produto usando um anticorpo específico acoplado a grânulos aceitadores de proteína A e um grânulo doador de Steptavidina para capturar o peptídeo. O ensaio é realizado em formato de placa de 384 poços usando proxiplates brancos. Todos os passos são realizados em tampão de ensaio (HEPES 50 mM pH 7,5, BSA 0,1% (p / v) e Tween-20 0,01% (v / v)). O FAS é dissolvido fresco a cada dia em HCl 20 mM até uma concentração de 400 mM e diluído para 1 mM em água desionizada. Todos os outros componentes são dissolvidos todos os dias em água desionizada. Para as determinações de IC50, 4,9 μL de tampão de ensaio contendo a enzima JMJD2E (concentração final de 2 nM) são transferidos para poços de uma proxiplaca de 384 poços. Titulações do composto (0,1 μL) são transferidas para cada poço e a enzima é pré-incubada por 15 min com o composto (a concentração final de DMSO é de 1%). A reação enzimática é iniciada pela adição de 5 μL de uma mistura de substrato que consiste em 2-OG (concentração final de 10 μM), FAS (concentração final de 1 μM), ácido L-ascórbico (concentração final de 100 μM) e substrato de peptídeo biotinilado (30 concentração final nM) e a reação foi deixada prosseguir durante 20 min à temperatura ambiente. A reação enzimática é interrompida pela adição de 5 μL de EDTA (concentração final de 7,5 mM no tampão de ensaio). Grânulos de doador de estreptavidina (0,08 mg / mL) e grânulos aceitadores conjugados com Proteína-A (0,08 mg / mL) são pré-incubados por 1 hora com anticorpo anti-H3-K9Me2 (0,2 μg / mL, Abcam). A presença do produto biotina-H3 é detectada pela adição de 5 μL das esferas AlphaScreen pré-incubadas (concentrações finais de 0,02 mg / mL em relação às esferas aceitadoras e doadoras). A detecção pode prosseguir durante 1 hora à temperatura ambiente e as placas de ensaio são lidas num leitor de placas BMG Pherastar FS. Os dados são normalizados para o controle sem enzima e o IC50 é determinado a partir do ajuste da curva de regressão não linear usando GraphPad Prism 5.

Grupo de Produto : Epigenética > Inibidor de histona demetilase