Tandutinib (MLN518) 387867-13-2

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 562,7 Tandutinibe (MLN518, CT53518) é um potente antagonista FLT3 com IC50 de 0,22 μM, também inibe PDGFR e c-Kit, potência 15 a 20 vezes maior para FLT3 versus CSF-1R e seletividade> 100 vezes para o mesmo alvo versus FGFR, EGFR e KDR. Fase 2. \ n Atividade biológica Tandutinibe tem pouca atividade contra EGFR, FGFR, KDR, InsR, Src, Abl, PKC, PKA e MAPKs. O tandutinib inibe o crescimento de células independentes de IL-3 e a autofosforilação de FLT3-ITD com um IC50 de 10-100 nM. O tandutinib também inibe a proliferação de células Ba / F3 de leucemia humana contendo mutações FLT3-ITD com valores de IC50 de 10-30 nM, e as células Molm-13 e Molm-14 positivas para FLT3-ITD com um IC50 de 10 nM. Em células Molm-14 positivas para FLT3-ITD, mas não nas células THP-1 negativas para FLT3-ITD, o tratamento com tandutinibe leva a apoptose significativa em 51% e 78% em 24 e 96 horas, respectivamente, devido à inibição específica de FLT3. O tandutinib inibe preferencialmente o crescimento de colônias de blastos de FLT3 ITD-positivo em comparação com pacientes ITD-negativos com LMA, sem afetar a formação de colônias por células progenitoras humanas normais. A administração oral de Tandutinibe a 60 mg / kg bid aumenta significativamente a sobrevivência em camundongos com células Ba / F3 que expressam o mutante W51 FLT3-ITD e dá uma redução significativa na mortalidade em um modelo de transplante de medula óssea em camundongos. O tratamento com tandutinibe a 180 mg / kg duas vezes ao dia tem toxicidade leve em direção à hematopoiese normal, no entanto, é uma dose na qual Tandutinibe é eficaz no tratamento da leucemia FLT3 ITD-positiva em camundongos. \ n Ensaios de autofosforilação de receptor baseado em células Os ensaios de autofosforilação da família de quinase PDGFR são ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA) baseados em células usando células CHO que expressam PDGFRβ de tipo selvagem, proteína quimérica PDGFRβ / c-Kit e PDGFRβ / Flt3 que contêm o extracelular e domínios transmembranares de PDGFRβ e o domínio citoplasmático de c-Kit e Flt-3. As células são cultivadas até a confluência em placas de microtitulação de 96 poços em condições padrão de cultura de tecidos, seguido por privação de soro por 16 horas. Resumidamente, as células quiescentes são incubadas a 37 ° C com concentrações crescentes de Tandutinib durante 30 minutos seguido pela adição de 8 nM de PDGF-BB durante 10 minutos. As células são lisadas em Tris 100 mM, pH 7,5, NaCl 750 mM, Triton X-100 a 0,5%, pirofosfato de sódio 10 mM, NaF 50 mM, aprotinina 10 μg / mL, leupeptina 10 μg / mL, fluoreto de fenilmetilsulfonil 1 mM, 1 mM vanadato de sódio, e o lisado é depurado por centrifugação a 15.000g durante 5 minutos. Os lisados ​​clarificados são transferidos para uma segunda placa de microtitulação na qual os poços são previamente revestidos com 500 ng / poço de mAb anti-PDGFRβ 1B5B11 e depois incubados durante 2 horas à temperatura ambiente. Depois de lavar três vezes com tampão de ligação (0,3% de gelatina, 25 mM de HEPES, pH 7,5, 100 mM de NaCl, 0,01% de Tween 20), 250 ng / mL de anticorpo policlonal anti-fosfotirosina de coelho são adicionados e as placas são incubadas a 37 ° C por 60 minutos. Subsequentemente, cada poço é lavado três vezes com tampão de ligação e incubado com 1 μg / mL de anticorpo anti-coelho conjugado com peroxidase de rábano a 37 ° C por 60 minutos. Os poços são lavados antes de adicionar 2,2'-azino-bis (ácido 3-etilbenztiazolina-6-sulfônico) e a taxa de formação de substrato é monitorada a 650 nm. Método As células são expostas a concentrações crescentes de Tandutinibe (0,004-30 μM). As células são cultivadas durante 3-7 dias em cultura de tecidos e as células viáveis, determinadas por exclusão de corante azul de tripano, são contadas. Em intervalos diários, as células são colhidas, lavadas e ressuspensas em 100 µL de tampão de ligação contendo HEPES 10 mM (pH 7,4), NaCl 140 mM e CaCl2 2,5 mM. Anexina V-FITC (100 ng) e iodeto de propídio (250 ng) são adicionados à suspensão de células seguido de incubação em temperatura ambiente por 15 minutos. A citometria de fluxo é realizada imediatamente após a coloração em um citômetro de fluxo FACSort com excitação a 488 nm. A fluorescência da anexina V-FITC e a coloração com DNA-iodeto de propídio são medidas a 515 nm e 585 nm, respectivamente.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor FLT3