MS436 1395084-25-9

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Atividade biológica MS436 exibe baixa afinidade nanomolar com preferência para o primeiro bromodomínio sobre o segundo. MS436 inibe efetivamente a atividade de BRD4 na produção de óxido nítrico dirigida por NF-κB e citocina interleucina-6 pró-inflamatória em macrófagos murinos sem inibição significativa da viabilidade celular. \ n Ensaio de ligação de anisotropia de fluorescência A afinidade de ligação dos compostos de diazobenzeno recentemente sintetizados para várias bromodoaminas é avaliada em um ensaio de competição de anisotropia de fluorescência usando um isotiocianato de fluoresceína (FITC) MS417 marcado como uma sonda de ensaio. Os experimentos de competição são realizados com uma proteína BrD (0,25-1 µM) e a sonda fluorescente (80 nM), e aumentando a concentração de ligante competidor não marcado em um tampão PBS (pH 7,4) em um volume total de 80 µL. As medições são obtidas após 1 hora de incubação do ligante fluorescente e da proteína a 25 ° C com leitor de microplaca Safire 2. Em um ensaio de ligação por competição, a concentração de ligante fluorescente é ≤ 2Kd, e a concentração de proteína foi estabelecida na qual 50-80% do ligante fluorescente está ligado. A constante de dissociação de um ligante competidor é calculada com a correção da equação de Cheng-Prussoff introduzida por Nicolovska-Coleska e colegas. Assumindo o modelo de ligação competitiva de um local, a equação usada para calcular Ki`s a partir dos valores IC50 recuperados dos dados de ajuste usando o Prism. Método Células RAW264.7 de macrófago murino são semeadas a uma densidade de 10.000 células por poço em uma placa de 96 poços e incubadas a 37 ° C por 18 h. As células são então tratadas com os inibidores do bromodomínio diazobenzeno até 100 μL por 24 horas. No final da incubação de 24 horas, 10 μL da solução de MTT (4 mg / ml) são adicionados a cada poço e incubados a 37 ° C por 4 horas. Os sobrenadantes são então removidos e as células solubilizadas em 100 μL de DMSO 100%. Os compostos de diazobenzeno são primeiro dissolvidos em DMSO e depois diluídos com meio de cultura para concentrações que variam de 0,28 a 50000 nM. A concentração final de DMSO é ajustada para 0,05% (v / v). A extensão da redução é medida pela absorvância a 570/630 nm usando EnVison 2104 Multilabel Reader.

Grupo de Produto : Epigenética > Inibidor de domínio de leitor epigenético