NVP-BHG712 940310-85-0

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 503.48 NVP-BHG712 é um inibidor de EphB4 específico com ED50 de 25 nM que discrimina entre VEGFR e inibição de EphB4; também mostra atividade contra c-Raf, c-Src e c-Abl com IC50 de 0,395 μM, 1,266 μM e 1,667 μM, respectivamente. \ n O tratamento com atividade biológica NVP-BHG712 também leva à inibição da autofosforilação de RTK em transfectados estáveis Células de melanoma A375 com EC50 de 25 nM e 4,2 μM para EphB4 e VEGFR2, respectivamente. Em um modelo de angiogênese induzida por fator de crescimento, NVP-BHG712 (3 mg / kg, po) suprime significativamente a formação de tecido estimulada por VEGF e a vascularização pela inibição da sinalização direta de EphB4. Além disso, NVP-BHG712 (10 mg / kg / kg, po) reverte potentemente a formação de tecido e o crescimento de vasos aumentados por VEGF. NVP-BHG712 (3 mg / kg, po) mostra uma exposição de longa duração com concentrações em torno de 10 μM no plasma, bem como no pulmão e tecido do fígado por até 8 horas e, portanto, resulta em uma inibição de longa duração da atividade da quinase EphB4 em camundongos. \ n Ensaios de quinase in vitro Todos os ensaios de quinase in vitro são realizados com quinases purificadas recombinantes adquiridas de fornecedores externos ou produzidas internamente. Para estimar a atividade da quinase, ambos, LanthaScreenTM baseado em TR-FRET e deslocamento de mobilidade Caliper são usados. Em resumo, a tecnologia de ensaio LanthaScreenTM é baseada na discriminação entre o substrato não fosforilado e o produto fosforilado por um anticorpo fosfo-específico, ligando-se apenas à versão fosforilada do substrato. Ambos, anticorpo e substrato, carregam rótulos fluorescentes e a proximidade dos rótulos no complexo formado permite a medição de um sinal de transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET). A leitura do sinal FRET de uma maneira dependente do tempo / limitada pelo tempo melhora ainda mais o desempenho do ensaio, reduzindo a fluorescência de fundo. Para medições de dose-resposta, NVP-BHG712 é pré-diluído em DMSO 90% e 50 nL de soluções de composto são dispensados ​​diretamente na placa de ensaio vazia usando um nanodispensador HummingBird. As reações de quinase são iniciadas pela adição de 4,5 μL de solução de ATP (4 μM de ATP, 20 mM de Tris / HCL, 1 mM de DTT, 0,03% de Tween20, 0,01 mM de Na3VO4) e 4,5 μL de mistura de enzima / substrato (100 nM de fluoresceína poli-GAT) , 0,5% de albumina de soro bovino, 20 mM de Tris / HCL, 1 mM de DTT, 0,03% de Tween20, 0,01 mM de Na3VO4). Outros componentes da mistura enzima / substrato são as enzimas, bem como MgCl2 / MnCl2, que são ajustados especificamente aos requisitos da enzima individual. Após incubação por 60 minutos à temperatura ambiente, as reações de quinase são interrompidas pela adição de 4,5 μL de solução de parada (50 mM EDTA pH 8,0, 0,04% NP-40, 20 mM Tris / HCl pH 7,4) seguido por 4,5 μL de mistura de detecção (1,72 μg / mL de anticorpo Tb-PY20), albumina de soro bovino a 1%, Tris / HCl 20 mM, DTT 1 mM, Tween20 a 0,03%, Na3VO4 a 0,01 mM). Após incubação por 45 minutos à temperatura ambiente, as placas são analisadas em um leitor de placas BMG PHERAstar. Nos ensaios de deslocamento de mobilidade Caliper, as reações de quinase são analisadas por eletroforese capilar microfluídica. A transferência de fosfato de ATP para um peptídeo curto por uma quinase causa uma mudança na carga líquida do peptídeo em -2. A diferença de carga entre as entidades não fosforiladas e fosforiladas do peptídeo pode ser separada em um campo elétrico. O uso de peptídeos anexados com um marcador fluorescente permite a detecção e quantificação de ambas as formas e, portanto, o cálculo do turnover da reação. Para medições de dose-resposta, NVP-BHG712 é pré-diluído em DMSO 90% e alíquotas de 50 nL de solução são dispensadas diretamente na placa de ensaio vazia usando um nanodispensador HummingBird. As reações de quinase são iniciadas pela adição de 4,5 μL de mistura de substrato que consiste em ATP e substrato de peptídeo em tampão de ensaio (HEPES 50 mM pH 7,5, albumina de soro bovino 0,02%, DTT 1 mM, Tween20 0,02%, Na34 0,01 mM, beta- 10 mM glicerofosfato) e 4,5 μL de solução de enzima em tampão de ensaio. A concentração de peptídeo é de 2 μM nos ensaios. As concentrações para a enzima, bem como para MgCl2 e MnCl2 são ajustadas especificamente para as necessidades de cada enzima. As concentrações de ATP são ajustadas aos valores de Km da enzima específica. Após incubação por 60 minutos a 30 ° C, as reações de quinase são interrompidas pela adição de 16 μL de solução de parada (HEPES 100 mM pH 7,5, DMSO 5%, reagente de revestimento 0,1% EDTA 10 mM pH 8,0, BRIJ35 0,015%). As reações de quinase interrompidas são analisadas em um leitor LC3000.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor do receptor de efrina