.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: 300,37 IU1 é um inibidor de proteassoma permeável à célula, reversível e seletivo de USP14 humano com IC50 de 4,7 μ M, 25 vezes seletivo para IsoT. \ n IU1 se liga especificamente ao forma ativada de USP14. IU1 pode potencialmente inibir USP14, impedindo seu encaixe no proteassoma, exibindo pouca ou nenhuma atividade em relação a 8 outros DUBs, IsoT, UCH37, BAP1, UCH-L1, UCH-L3, USP15, USP2, USP7. A inibição de USP14 é rapidamente estabelecida após a adição de IU1 e rapidamente revertida após sua remoção. IU1 inibe o corte de cadeia induzido por USP14 e diminui a mobilidade eletroforética de espécies Ub-CCNB. IU1 aumenta a degradação proteassomal de Ub-CCNB na presença de USP14. IU1 promove a degradação de tau e esgota o TDP-43, ATXN3 e a proteína glial fibrilar ácida (GFAP) em mecanismos proteotóxicos. \ n Protocolo (apenas para referência) Ensaio de cinase: [1]
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High-throughput screening
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Screening is conducted at the ICCB-Longwood screening facility. 10 μL of recombinant USP14 protein are dispensed into each well of a 384-well low volume plate in duplicate, using a Wellmate plate dispenser. 33.3 nL of compound from the library are pin-transferred into the wells using a Seiko pin transfer robotic system, followed by pre-incubation for about 30 min. The last two columns of each plate are used for positive and negative controls for the assay. To initiate the enzyme reaction, 10 μL of VS-proteasome plus Ub-AMC mixture are added to each well, using a Wellmate dispenser. Samples are then incubated for another 45 min. Ub-AMC hydrolysis is measured at Ex355/Em460 using an Envision plate reader. The final concentrations of USP14, VS-proteasome and Ub-AMC are 15 nM, 1 nM and 0.8 μM, respectively. The final concentration of test compound is approximately 17 μM. Enzymes and substrates are prepared in Ub-AMC assay buffer (50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM EDTA, 1 mM ATP, 5 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 1 mg/Ml ovalbumin).
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Ensaio de células: [1]
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Cell lines
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MEF cells
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Concentrations
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~1.5 mM
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Incubation Time
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48 hours
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Method
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MTT
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Conversão de diferentes modelos de animais com base em BSA (valor com base em dados das diretrizes preliminares da FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
|
0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
|
0.24
|
0.15
|
0.05
|
0.025
|
0.02
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0.007
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Km factor
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20
|
20
|
12
|
12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por exemplo, para modificar a dose de resveratrol usada para um camundongo (22,4 mg / kg) para uma dose baseada na BSA para um rato, multiplique 22,4 mg / kg pelo fator Km para um camundongo e, em seguida, divida pelo fator Km para um rato. Este cálculo resulta em uma dose equivalente de rato para o resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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\ n Informação Química
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Molecular Weight (MW)
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300.37
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Formula
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C18H21FN2O
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CAS No.
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314245-33-5
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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60 mg/mL
(199.75 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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60 mg/mL
(199.75 mM)
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Chemical Name
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Ethanone, 1-[1-(4-fluorophenyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl]-2-(1-pyrrolidinyl)-
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Stock Solution (1ml DMSO)
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1mM
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10mM
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20mM
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30mM
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Mass(mg)
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0.30037
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3.0037
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6.0074
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9.0111
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Grupo de Produto : Ubiquitina > Inibidor DUB
