CRT0044876 6960-45-8

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 206,15 CRT0044876 é um inibidor de APE1 potente e seletivo com IC50 de ~ 3 μM. \ n Atividade biológica CRT0044876 inibe potentemente as atividades da endonuclease AP, 3'-fosfodiesterase e 3'-fosfatase de APE1 e exibe a seletividade para a inibição da família da exonuclease III. CRT0044876 potencializa a citotoxicidade de vários compostos de direcionamento de base de DNA com um acúmulo de locais AP não reparados. O CRT0044876, pela inibição da via de BER, aumenta o dano oxidativo ao DNA relacionado temporalmente ao aumento das espécies reativas de oxigênio intracelular em um microambiente tumoral ácido e, portanto, resulta em paradas do ciclo celular e aumento das quebras da fita dupla de DNA, levando à morte celular. \ n O tampão de reação do ensaio de clivagem do sítio AP de BER compreende 40 mM de HEPES-KOH (pH 7,8), 5 mM de MgCl2, 0,5 mM de DTT e 0,1 mM de EDTA. Uma reação de clivagem de sítio AP de 10 μl composta por mistura de tampão BER, proteína purificada (concentração final de 3,3 nM de APE1) e oligonucleotídeo de fita dupla de sítio AP reduzido de 0,75 ng. A mistura é incubada a 37 ° C durante 1 h. Um total de 1 μl de tampão de parada (50% glicerol, 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 0,1% de azul de bromofenol e 0,1% de cianol de xileno) é adicionado e a mistura de amostra é desnaturada a 90-100 ° C por 2 min. A amostra é então executada em 15% TBE Criterion ™ Pre-Cast Gel, com eletroforese a uma corrente constante de 30 mA por 30 min, e o substrato radiomarcado e os produtos de reação são visualizados usando um phosphorImager. A atividade inibidora de compostos potenciais de APE1 são analisados ​​em concentrações de drogas que variam de 0,1 a 100 μM. As bandas radiomarcadas resolvidas são quantificadas usando análise de software ImageQuant e os valores de IC50 são calculados determinando a concentração do inibidor que reduziu a atividade de APE1 a 50% dos valores de controle. \ n Método \ n Células de fibrossarcoma HT1080 são cultivadas em meio RPMI a 2% [suplementado com penicilina 0,06 g / l, estreptomicina 0,1 g / l (pH 7,0), soro fetal bovino a 10% e glutamina 4 mM]. Apenas células com eficiência de plaqueamento ≥60% são usadas para análise de sobrevivência clonogênica. Placas de cultura de tecidos (10 cm) são semeadas com 500 células por placa e a cultura é mantida em uma incubadora umidificada a 37 ° C em uma atmosfera de 5% de CO2 e 95% de ar. Para avaliar o perfil de toxicidade dos supostos inibidores de APE1, várias concentrações (100–500 μM) do inibidor são adicionadas ao meio e as culturas foram incubadas por 7 a 10 dias até que as colônias de células sejam formadas. As colônias são fixadas [75% (v / v) de metanol, 25% (v / v) de ácido acético] por 30 min e coradas com violeta de cristal (1 mg / ml em água destilada) por 4 h em temperatura ambiente. Colônias visíveis são contadas em um contador de colônias. \ n

Grupo de Produto : Dano de DNA > Inibidor de síntese de DNA / RNA