Golvatinib (E7050) 928037-13-2

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 633.69 Golvatinibe (E7050) é um inibidor duplo de c-Met e VEGFR-2 com IC50 de 14 nM e 16 nM, não inibe o crescimento de HUVEC estimulado por bFGF (acima a 1000 nM). Fase 1/2. \ n Atividade biológica Estudos in vitro indicam que o E7050 inibe potentemente a fosforilação de c-Met e VEGFR-2. E7050 também reprime potentemente o crescimento de ambas as células tumorais amplificadas com c-met e células endoteliais estimuladas com HGF ou VEGF. E7050 contorna a resistência a todos os EGFR-TKIs reversíveis, irreversíveis e mutantes seletivos induzidos por HGF exógeno e / ou endógeno em linhas de células de câncer de pulmão mutantes EGFR, bloqueando a via Met / Gab1 / PI3K / Akt in vitro. E7050 também previne o surgimento de células HCC827 resistentes ao gefitinibe induzidas por exposição contínua ao HGF. Estudos in vivo usando E7050 mostram a inibição da fosforilação de c-Met e VEGFR-2 em tumores e forte inibição do crescimento tumoral e da angiogênese tumoral em modelos de xenoenxerto. O tratamento de algumas linhas de tumor contendo amplificações de c-met com altas doses de E7050 (50–200 mg / kg) induz a regressão e o desaparecimento do tumor. Em um modelo de disseminação peritoneal, E7050 mostra um efeito antitumoral contra tumores peritoneais, bem como um prolongamento significativo da vida útil em camundongos tratados. Em outra pesquisa de modelo de xenoenxerto, os tumores produzidos por células Ma-1 transfectadas com HGF (Ma-1 / HGF) são mais angiogênicos do que os tumores de controle de vetor e mostram resistência ao ZD1839. E7050 sozinho inibe a angiogênese e retarda o crescimento de tumores Ma-1 / HGF. E7050 combinado com ZD1839 induz uma regressão marcada do crescimento do tumor. \ n Análise de Western blot O status de fosforilação de c-Met e VEGFR-2 é detectado por análise de Western blot. Para c-Met, as células MKN45 são incubadas com uma diluição em série de E7050 em meio completo a 37 ° C por 2 h. Para VEGFR-2, HUVEC são privados de meio sem soro endotelial humano contendo 0,5% de FBS por 24 h. Subsequentemente, as HUVEC são incubadas com uma diluição em série de E7050 por 1 h e, em seguida, incubadas com 20 ng / mL de VEGF humano por 5 min. As células são lisadas por tampão de lise (HEPES 50 mM [pH 7,4], NaCl 150 mM, glicerol 10%, Triton X-100 1%, MgCl2 1,5 mM, EDTA 1 mM [pH 8,0], NaF 100 mM, fluoreto de fenilmetilsulfonil 1 mM Ortovanadato de sódio 1 mM, aprotinina 10 μg / mL, leupeptina 50 μg / mL e pepstatina A 1 μg / mL). As amostras de tumor ressecadas são homogeneizadas com tampão de lise contendo β-glicerofosfato 25 mM e coquetel 2 de inibidor de fosfatase 0,5% (v / v) a 4 ° C. Os detritos celulares são removidos por centrifugação a 17 860 g durante 20 min a 4 ° C. Alíquotas dos sobrenadantes contendo 5-20 μg de proteína são submetidas a SDS-PAGE sob condições de redução. As proteínas são então transferidas para membranas de PVDF, bloqueadas com TBS contendo 0,05% de Tween-20 e 5% de leite desnatado ou 5% de BSA. As membranas são sondadas com os seguintes anticorpos: anticorpo policlonal anti-c-Met (C-28) e anticorpo policlonal anti-VEGFR-2 (C-20); clone 4G10 de anti-fosfotirosina de camundongo; e anticorpo policlonal anti-VEGFR-2, anticorpo policlonal anti-fosfo-VEGFR-2 (Tyr996) e anticorpo policlonal anti-fosfo-c-Met (Tyr1234 / 1235). A detecção é realizada usando um kit de quimioluminescência aprimorado Super Signal. As bandas imunorreativas são visualizadas por quimioluminescência com um sistema de detecção Image Master-VDS-CL. A intensidade de cada banda é medida usando um analisador de imagem. Método As células (1-3 × 103 células / 100 μL / poço) são semeadas em placas de cultura de 96 poços com várias concentrações de E7050 e cultivadas por 3 dias. Em seguida, 10 μL de reagente WST-8 são adicionados a cada poço e a absorbância é medida a 450 nm em comparação com uma medição de referência a 660 nm usando um leitor de microplacas MTP-500. HUVEC (2 × 103 células / poço) são cultivadas por 3 dias em meio contendo HGF (30 ng / mL), VEGF (20 ng / mL) ou fator de crescimento de fibroblasto básico (bFGF) (20 ng / mL) em conjunto com E7050 diluído.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor c-Met