NVP-BVU972 1185763-69-2

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 340,38 NVP-BVU972 é um inibidor seletivo e potente de Met com IC50 de 14 nM. \ n Atividade biológica NVP-BVU972 potentemente inibe MET quinase, mas exibe baixa inibição contra outras quinases incluindo a quinase RON mais intimamente relacionada com valores de IC50 de mais de 1000 nM. NVP-BVU972 também suprime a fosforilação MET constitutiva em células GTL-16 ou a fosforilação MET estimulada por HGF em células A549 com valores de IC50 de 7,3 nM e 22 nM, respectivamente. NVP-BVU972 impede potentemente o crescimento das linhas de células amplificadas do gene MET GTL-16, MKN-45 e EBC-1 com valores de IC50 de 66 nM, 82 nM e 32 nM, respectivamente. Em linha com sua alta frequência na tela NVP-BVU972, as mutações Y1230 e D1228 dão origem a mudanças dramáticas nos valores de IC50 medidos para NVP-BVU972 na linha celular BaF3. A resistência disparada por V1155L é mais limitada a NVP-BVU972. Uma redução dependente da dose na fosforilação de TPR-MET ao aplicar NVP-BVU972 a células BaF3 que expressam TPR-MET de tipo selvagem. Ambas as mutações Y1230H e D1228A anularam o efeito de NVP-BVU972, mas não AMG 458. No entanto, F1200I e L1195V interferem com a potência de NVP-BVU972 para prevenir a fosforilação de TPR-MET. Ensaio bioquímico TR-FRET com MET de tipo selvagem e mutantes A atividade da enzima é medida em um ensaio de transferência de energia de ressonância de fluorescência resolvida (TR-FRET), detectando fosforilação de tirosina com um anticorpo anti-fosfo-tirosina marcado com Eu (doador de fluorescência) e aloficocianina conjugado a estreptavidina (aceitador de fluorescência) que se liga a uma biotina no peptídeo substrato. Para cada variante, as concentrações de Km para ATP são determinadas na ausência de NVP-BVU972 e a concentração de ATP na reação de quinase é definida para Km (4 μM para MET wt, 1 μM para MET Y1230H e MET F1200I). NVP-BVU972 é dissolvido e diluído em DMSO e testado em quadruplicado. As reações de quinase são realizadas em 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 8 mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 0,05% de Tween 20, 0,05% de albumina de soro bovino, 0,1 mM de EDTA, 1 mM de DTT, 0,1 mM de Na3VO4, em placas brancas de 1536 poços à temperatura ambiente. NVP-BVU972 e enzima são incubados em um volume de 2 μL por 20 min, seguido pela adição de 1 μL de ATP e 1 μL de substrato de peptídeo biotinilado (PTK1) para concentrações finais de Km e 1 μM, respectivamente. As concentrações da enzima nas reações são 5 nM para MET wt e 4 nM para as variantes F1200I e Y1230H. Após 90 min, as reações são interrompidas pela adição de 1 μL de solução de detecção / parada para atingir as concentrações finais de EDTA 10 mM, anticorpo antifosfo-tirosina marcado com Eu 3,5 nM e Aloficocianina de estreptavidina 10 nM. A transferência de energia de ressonância de fluorescência resolvida no tempo é medida em um leitor de placas Envision (excitação 320 nm, emissão 615 nm e 665 nm). Método Células BaF3 contendo TPR-MET ou vários mutantes dos mesmos são cultivadas em meio RPMI 1640 contendo 10% de soro fetal de vitela. Para a manutenção das células BaF3 parentais, o meio é adicionalmente suplementado com 10 ng / mL de interleucina-3 (IL-3). Para os ensaios de proliferação, as células BaF3 são semeadas em placas de 96 poços em triplicados a 104 células por poço e incubadas com várias concentrações de NVP-BVU972 por 72 horas, seguido pela quantificação de células viáveis ​​usando uma leitura de redução de corante de sal de sódio de resazurina. Os valores de IC50 são determinados com o suplemento XLFit Excel usando um modelo de resposta à dose de 4 parâmetros.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor c-Met