OSI-930 728033-96-3

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 443.44 OSI-930 é um inibidor potente de Kit, KDR e CSF-1R com IC50 de 80 nM, 9 nM e 15 nM, respectivamente; também potente para Flt-1, c-Raf e Lck e baixa atividade contra PDGFRα / β, Flt-3 e Abl. Fase 1. \ n Atividade biológica OSI-930 inibe a proliferação celular na linha celular HMC-1 com IC50 de 14 nM sem efeito significativo no crescimento da linha celular COLO-205 que não expressa um receptor tirosina quinase mutante constitutivamente ativo. Além disso, OSI-930 também induz apoptose na linha celular HMC-1 com EC50 de 34 nM. Um estudo recente mostra que o OSI-930 inativa o citocromo P450 (P450) 3A4 recombinante purificado com um Ki de 24 μM em um modo dependente do tempo e da concentração. OSI-930, administrado na dose máxima eficaz de 200 mg / kg por gavagem oral, exibe atividade antitumoral potente em uma ampla gama de modelos de xenoenxerto pré-clínico, incluindo modelos de xenoenxerto HMC-1, NCI-SNU-5, COLO-205 e U251. Ensaios de proteína quinase Os ensaios de proteína quinase são feitos internamente por métodos de ensaio baseados em ELISA (Kit, KDR, PDGFRα e PDGFRβ) ou por um método radiométrico. Os ensaios ELISA internos utilizaram poli (Glu: Tyr) como substrato ligado à superfície das placas de ensaio de 96 poços; a fosforilação é então detectada usando um anticorpo antifosfotirosina conjugado com HRP. O anticorpo ligado é então quantificado usando ABTS como substrato da peroxidase medindo a absorvância a 405/490 nm. Todos os ensaios usam domínios catalíticos de quinase recombinante purificada que são expressos em células de inseto ou em bactérias. O Kit e a proteína EGFR usados ​​para os ensaios internos são preparados internamente; outras enzimas são obtidas. A proteína do kit recombinante é expressa como uma proteína de fusão da glutationa S-transferase do terminal NH2 em células de inseto e é inicialmente purificada como uma enzima não fosforilada (não ativada) com um Km relativamente alto para ATP (400 μM). Em alguns ensaios, uma forma ativada (fosforilada em tirosina) da enzima é preparada por incubação com ATP 1 mM por 1 hora a 30 ° C. A proteína fosforilada é então passada por uma coluna de dessalinização para remover a maior parte do ATP e armazenada a -80 ° C em tampão contendo 50% de glicerol. A preparação resultante tem uma atividade específica consideravelmente maior e um Km mais baixo para ATP (25 μM) do que a preparação inicial não fosforilada. A inibição da autofosforilação do Kit por OSI-930 é testada por incubação da enzima não fosforilada a 30 ° C na presença de 200 μM de ATP e várias concentrações de OSI-930. A reação é interrompida pela remoção de alíquotas em tampão de amostra SDS-PAGE seguido por aquecimento a 100 ° C por 5 minutos. O grau de fosforilação do Kit é então determinado por immunoblotting para o Kit total e o Kit fosforilado. \ n Método Para ensaios de proliferação celular e apoptose, as células são semeadas em placas de 96 poços e incubadas por 2 a 3 dias na presença de OSI-930 em várias concentrações. A inibição do crescimento celular é determinada pela quantificação luminescente do conteúdo de ATP intracelular usando CellTiterGlo. A indução de apoptose dependente de caspase por OSI-930 é quantificada por um ensaio enzimático de caspase 3/7. A inibição da angiogênese por OSI-930 é monitorada usando o ensaio de crescimento de broto endotelial do anel aórtico de rato. Seções de aorta são preparadas a partir de ratos machos sacrificados com CO2 e cultivadas in vitro em uma matriz de colágeno na presença ou ausência de OSI-930. A matriz de colágeno é preparada a partir de colágeno de cauda de rato tipo 1 solubilizado em 0,1% de ácido acético a 3 mg / mL, que é combinado com 0,125 volume de tampão de colágeno (0,05 N NaOH, 200 mM HEPES, 260 mM NaHCO3), 0,125 volume de meio 199 , 0,0125 volume de 1 M NaOH, e 1% GlutaMax. Os anéis aórticos são incluídos em 0,4 mL desta matriz em placas de seis poços, aos quais 0,5 mL de meio basal endotelial e a quantidade apropriada de OSI-930 são adicionados; os anéis são então incubados por 10 dias e o crescimento do broto angiogênico resultante é quantificado digitalmente a partir de imagens por medição da área contendo broto dentro de uma série de anéis concêntricos ao redor da área do tecido aórtico.

Grupo de Produto : Proteína Tirosina Quinase > Inibidor c-kit