GSK1070916 942918-07-2

.cp_wz table {border-top: 1px solid #ccc; border-left: 1px solid #ccc; } .cp_wz table td {border-right: 1px solid #ccc; borda inferior: 1px sólido #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz tabela th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; preenchimento: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 507,63 GSK1070916 é um inibidor reversível e competitivo de ATP de Aurora B / C com IC50 de 3,5 nM / 6,5 nM. Ele exibe seletividade> 100 vezes contra o complexo Aurora A-TPX2 intimamente relacionado. Fase 1. \ n Atividade biológica GSK1070916 inibe seletivamente Aurora B e Aurora C com Ki de 0,38 nM e 1,5 nM sobre Aurora A com Ki de 490 nM. A inibição de Aurora B e Aurora C é dependente do tempo, com uma meia-vida de dissociação do inibidor de enzima de> 480 min e 270 min, respectivamente. Além disso, GSK1070916 também é um inibidor competitivo em relação ao ATP. Células tumorais humanas tratadas com GSK1070916 mostram inibição dependente da dose de fosforilação na serina 10 da Histona H3, um substrato específico para Aurora B. Além disso, GSK1070916 inibe a proliferação de células tumorais com valores de EC50 de. Em outro estudo, também é relatado alto cromossomo O número associado à resistência à inibição de Aurora B e C sugere que células com um mecanismo para contornar o ponto de verificação de alta ploidia são resistentes a GSK1070916. GSK1070916 (25, 50 ou 100 mg / kg) mostra a inibição dependente da dose de fosforilação de um substrato específico de Aurora B em camundongos e consistente com sua ampla atividade celular, tem efeitos antitumorais em 10 modelos de xenoenxerto de tumor humano, incluindo mama, cólon, pulmão e dois modelos de leucemia. \ n Ensaio de quinase A capacidade de GSK1070916 de inibir as enzimas Aurora é medida usando ensaios de quinase in vivo. Os ensaios medem a capacidade de Aurora A, Aurora B e Aurora C de fosforilar um substrato peptídico sintético. Biotina-Ahx-RARRRLSFFFFAKKK-NH2 é usado para o ensaio Aurora A – TPX2 LEADseekerTM e 5FAM-PKAtide é usado para o ensaio IMAPTM para todas as três quinases Aurora. Para levar em consideração a inibição dependente do tempo das enzimas Aurora, Aurora A – TPX2, Aurora B – INCENP e Aurora C – INCENP são incubados com GSK1070916 em várias concentrações por 30 min antes de as reações serem iniciadas com a adição de substratos. Para o ensaio Aurora A LEADseekerTM, as condições finais do ensaio são 0,5 nM Aurora A-TPX2, 1 μM de substrato de peptídeo, 6 mM de MgCl2, 1,5 μM de ATP, 0,003 μCi / μL [γ-33P] ATP em 50 mM de Hepes, pH 7,2, 0,15 mg / mL BSA, 0,01% Tween-20, 5 mM DTT e 25 mM KCl. As reações são incubadas à temperatura ambiente (25 ° C) durante 120 min e terminadas pela adição de grânulos LEADseekerTM em PBS contendo EDTA (concentração final de grânulos de 2 mg / mL e EDTA 25 mM). As placas são então seladas e as contas são deixadas em repouso durante a noite. A formação do produto é quantificada usando um Viewlux Imager. Para os ensaios IMAPTM, Aurora A – TPX2 (concentração final 1 nM), Aurora B – INCENP (concentração final 2 nM) ou Aurora C – INCENP (concentração final 2,5 nM) é adicionado às placas contendo o composto em 5 μL de tampão (Hepes 25 mM, pH 7,2, para Aurora A, Hepes 25 mM, pH 7,5, para Aurora B e Hepes 20 mM, pH 7,2, para Aurora C) contendo 0,15 mg / mL de BSA, 0,01% de Tween 20 e 25 mM de NaCl. Esta mistura é incubada à temperatura ambiente durante 30 min. Para iniciar a reação, 5 μL de uma solução de substrato são adicionados contendo o mesmo tampão Hepes usado para a pré-incubação, NaCl 25 mM, MgCl2 (2, 4 e 4 mM para Aurora A, B e C respectivamente), DTT ( 4, 4 e 2 mM para Aurora A, B e C respectivamente), ATP (4, 4 e 10 μM para Aurora A, B e C respectivamente), 5FAM-PKAtide 200 nM, Tween 20 0,01% e BSA 0,15 mg / mL . As reações são incubadas à temperatura ambiente por 120 min para Aurora A e B e 60 min para Aurora C. Essas reações são então encerradas pela adição de 10 μL de reagente de ligação progressiva 1: 500 (1: 600 para Aurora C) em 95 % De tampão de ligação progressiva A e 5% de tampão de ligação progressiva B. As placas são incubadas à temperatura ambiente durante aprox. 90-120 min (tempo permitido para que o equilíbrio seja alcançado). As placas são lidas em um leitor de placas Molecular Devices Analyst no modo de polarização de fluorescência. \ n Método As células são colocadas em placas de 96 poços no meio de crescimento recomendado e incubadas a 37 ° C em 5% de CO2 durante a noite. No dia seguinte, as células são tratadas com diluições em série de GSK1070916. Neste momento, um conjunto de células é tratado com CellTiter-Glo por um tempo igual a 0 (T = 0) medição. Após uma incubação de 6 a 7 dias com o composto, a proliferação celular é medida usando o reagente CellTiter-Glo de acordo com o protocolo recomendado pelo fabricante. Como a inibição de Aurora B induz endomitose, cujo grau difere dependendo do tipo de célula, um tempo de tratamento de composto estendido é necessário para refletir com precisão os efeitos na viabilidade celular em um grande painel de linhas celulares. Para análise de viabilidade celular, os valores dos poços sem células são subtraídos para correção de fundo e os dados plotados como uma porcentagem das amostras de controle tratadas com DMSO usando o software Microsoft Excel XLfit4. Os valores de EC50 representam a concentração de GSK1070916 onde 50% do efeito máximo é observado

Grupo de Produto : Epigenética > Aurora Inibidor de Cinase